Определение и причины изменения осмотической резистентности эритроцитов

Метод определения показателя

В лаборатории исследование осмотической устойчивости эритроцитов проводят разведением крови в растворах поваренной соли (NaCl) различных концентраций. В сравнении с содержанием ионов натрия и хлора в цитоплазме эритроцитов выделяют растворы:

Изотонический. Концентрация соли равна примерно 0,9% – это ее норма в крови. В нем изменения клеток крови не происходит. Широко известно другое его название – физиологический раствор (физраствор).
Гипотонические. Концентрация ионов в них ниже, из-за осмотического давления в эритроциты поступает вода, и они набухают вплоть до гемолиза (разрушения).
Гипертонические. Содержание соли в них больше – клетки отдают воду и съеживаются.

Методика оценки осмотической резистентности эритроцитов следующая:

в пробирки наливают гипотонические растворы (так как в них наблюдается гемолиз) поваренной соли различных концентраций (обычно в диапазоне от 0,22 до 0,7%),
добавляют по 0,02 миллилитра собранной из пальца или из вены (оттуда результаты будут «чище») крови,
полученные растворы держат на экспозиции около часа (для воздействия осмотического давления на эритроциты),
после содержимое пробирки центрифугируют.

По оттенку определяют степень гемолиза (полный гемолиз – ярко-красный раствор, его начало – раствор с розоватым оттенком), для получения более точных показателей используют фотоколориметр – аппарат для оптического измерения концентрации вещества.

В лабораторной диагностике для определения осмотической резистентности эритроцитов используют следующие показатели:

Максимальная резистентность. Она равна концентрации раствора NaCl, при которой в течение трех часов происходит полный гемолиз. Норма для взрослого человека – от 0,32 до 0,34%, норма для детей грудного возраста – 0,24-0,32%, дошкольного возраста – 0,26-0,36%.
Минимальная резистентность. Равна концентрации того же раствора, при которой в течение трех часов гемолизу подвергаются только малоустойчивые клетки (цвет раствора получится слегка розовым). Норма для взрослого человека – 0,46-0,48%, норма для детей грудного возраста – 0,46-0,50%, дошкольного возраста – 0,46-0,48%.

В целом у людей солидного возраста осмотическая резистентность эритроцитов ниже, у детей она выше, но ее диапазон шире.

К осмотической стойкости эритроцитов

Вернемся к эритроцитам. Что будет, если взять кровь в пробирке и долить в нее дистиллированной воды? Тогда произойдет обратный процесс. Внутри эритроцитов такая же среда, как в организме, 0,85% хлорида натрия. Снаружи, в дистиллированной воде — 0%. Поэтому дистиллированная вода очень быстро поступает внутрь эритроцитов, чтобы выровнять концентрацию внутри и снаружи.

Клетки постепенно раздуваются, поглощая воду, становятся шарообразными, и, наконец, лопаются. Происходит так называемый гемолиз, и кровь становится прозрачной. Эритроцитов там уже нет. Все их мембраны разрушены, и пигмент гемоглобин растворен в воде. Такая кровь называется «лаковой», так как очень напоминает красноватый лак.

Если поместить эритроциты в гипертонический раствор, то он, напротив, будет высасывать из них всю воду, и они, в конце концов, сморщатся, как те самые помидоры. Все мы знаем, что гипертонические повязки с раствором крепкой поваренной соли, будучи положены на гнойные раны, способствуют их очищению, поскольку забирают всё раневое отделяемое, а полоскания воспаленных и рыхлых миндалин при ангинах соленой водой уменьшают отек и боль. Вот на таких простых принципах и построен этот анализ.

Осмотическая резистентность эритроцитов — это та предельно низкая концентрация в крови поваренной соли, при которой клетки крови ещё не разрушаются. Если чуть-чуть уменьшить эту концентрацию, то все клетки лопаются, и происходит гемолиз. Если осмотическая резистентность эритроцитов высокая, то тогда гемолиз произойдет, когда концентрация соли в диагностическом растворе будет достаточно низкой: мембраны клеток здоровы и упорно сопротивляются разведению.

Если же резистентность эритроцитов плохая, то уже незначительное уменьшение концентрации поваренной соли в растворе вызовет их разрушение. Отсюда можно сделать простой, но важный вывод. Если клеточная мембрана эритроцитов является дефектной, синтезированной «с браком», то тогда резистентность будет ниже, чем у здоровых клеток крови. А это значит, что этот простой анализ позволяет если не определить, то заподозрить наследственные заболевания крови, например, различные виды гемолитических анемий, талассемии, и других болезни.

Причины изменения показателей

Повышение осмотической стойкости (максимальная резистентность меньше 0,32%) возникает при следующих патологиях:

Массивные кровопотери (более 5% от объема крови), так как в качестве компенсаторного механизма в крови увеличивается число молодых эритроцитов, но в условиях дефицита ресурсов. В итоге образуется большое количество клеток с недостаточно прочными мембранами.
Атеросклероз: производные холестерина могут откладываться на мембране эритроцита, что приводит к изменению ее свойств.
Механическая желтуха, ее причины: закупорка желчевыводящих протоков вследствие образования желчных камней, заболевания желчного пузыря и некоторые болезни печени.
Наследственные анемии, связанные с изменением структуры гемоглобина (гемоглобинопатии): талассемия, серповидно-клеточная анемия.
Наследственные заболевания, в результате которых изменяется структура мембраны эритроцитов (мембранопатии).
Состояние после удаления селезенки.
Истинная полицитемия – чрезмерное увеличение количества клеток крови из-за опухоли в кроветворных органах.
Рак органов желудочно-кишечного тракта.

Снижение осмотической резистентности (минимальная становится выше 0,48%) может быть связано с:

Отравлением свинцом и его производными.
Гемолитической анемией, при которой происходит массивный гемолиз красных кровяных телец. Причины различны: аутоиммунные, наследственные заболевания, гемолитическая желтуха новорожденных и другие.
Небольшое снижение возможно из-за туберкулеза, сердечной недостаточности, лейкоза (рак крови), цирроза печени.

Осмотическая резистентность эритроцитов

Нормальная максимальная осмотическая резистентность эритроцитов составляет 0.34— 0,32 %, а минимальная — 0,48—0,46 %.

Под осмотической резистентностью эритроцитов понимается их устойчивость по отношению к гипотоническим растворам натрия хлорида. Минимальная резистентность

эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида (в серии растворов с постепенно уменьшающейся концентрацией), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе в течение 3 ч; максимальная — минимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов крови, помещенных в этот раствор.

Максимальная осмотическая резистентность ниже 0,32 % возможна после больших кро-вопотерь и спленэктомии, при гемоглобинозе С, застойных желтухах, а также в некоторых случаях полицитемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов ниже 0,32 % характерно для талассемии и гемоглобинопатии.

Минимальная осмотическая резистентность выше 0,48 % наблюдается при семейной гемолитической анемии, гемолитической анемии новорожденных и отравлении свинцом. Можно обнаружить небольшие изменения и при токсикозах, бронхопневмониях, туберкулезе, малярии, лейкемии, миелосклерозах, лимфогранулематозе, циррозе печени. Случаи расширения границ осмотической резистентности (одновременное понижение минимальной и повышение максимальной резистентности) наблюдаются в начале острого гемолитического криза и в остром периоде пернициозной анемии.

Кислотная резистентность эритроцитов (проба Хема)

В норме проба Хема отрицательная.

Кислотную резистентность определяют на основании различной кислотоустойчивости эритроцитов по отношению к HCl.

При анемии Маркиафавы и некоторых других гемолитических анемиях в подкисленной пробирке по сравнению с контролем обнаруживают ясный гемолиз.

Серповидные эритроциты в крови

В норме проба на серповидность эритроцитов отрицательная.

Пробу применяют для диагностики гемоглобинопатии. Гемоглобин S при понижении парциального давления кислорода кристаллизуется в форме тактоидов и придает эритроцитам форму серпа. Среди гемоглобинопатии чаще всего встречается серповидно-клеточная анемия, поэтому выявление эритроцитов в виде серпа позволяет установить этот вид анемии.

Предыдущая Следующая

www.urologi.ru

Причины отклонения от нормы

Норма показателей может нарушаться вследствие определенных заболеваний как острого, так и хронического типа. Максимальные показатели резистентности могут наблюдаться в следующих случаях:

атеросклероз;
злокачественные новообразования в желудочно-кишечном тракте;
талассемия;
полицитемия, но только в некоторых случаях;
спленэктомия;
гемоглобинопатия;
гемоглобиноз;
застойная желтуха;
врожденные заболевания крови;
системные и аутоиммунные патологии.

Минимальная осмотическая резистентность может быть следствием таких патологических процессов:

железодефицитная анемия;
гемолитическая анемия у новорожденных;
отравление тяжелыми металлами;
обширная интоксикация организма;
наследственная форма гемолитической анемии.

Небольшое отклонение от нормы может быть обусловлено такими заболеваниями:

лейкоз;
цирроз печени;
туберкулез.

Предрасполагающие факторы для снижения устойчивости ККТ:

выработка шарообразных эритроцитов — генетическое отклонение;
завершение жизненного цикла ККТ, что приводит к шарообразной форме;
сердечно-сосудистые заболевания.

Определить, что именно привело к такому нарушению, можно только путем диагностических мероприятий. Поводом для начала обследования будет соответствующая клиническая картина.

Предотвращение снижения ОРЭ

Консультация генетика для профилактики наследственной патологии

Как правило, причиной снижения резистентности клеток становятся наследственные заболевания. Пациенты, столкнувшиеся с такой проблемой, могут обратиться к генетику, чтобы рассчитать возможность появления такого же заболевания у их детей. В остальных случаях профилактика снижения плотности мембраны клеток крови сводится к ведению здорового образа жизни, отсутствию вредных привычек, созданию наиболее благоприятных условий для процесса кроветворения.

Признаки нарушения устойчивости

Нарушение ОРЭ сопровождается следующими симптомами:

Упадком сил.
Отсутствием аппетита.
Быстрой общей усталостью.
Падением веса тела.
Постоянной сонливостью.
Бледностью слизистых.
Значительным повышением температуры.

При падении устойчивости, эритроциты помечаются системой иммунитета (маркерами), и выводятся из организма селезенкой. При этом печень не успевает нейтрализовать выделившийся при разрушении клеток билирубин, в результате развивается гемолиз. При развитии такого процесса анализ крови показывает недостаток красных клеток, а организм испытывает дефицит кислорода.

Как проводят анализ

Метод определения осмотической резистентности эритроцитов связан с использованием гипотонических растворов концентрацией от 0,22 до 0,7%. В них помещают одинаковое количество крови. Эту смесь держат около часа при комнатной температуре, а затем подвергают обработке в центрифуге. При этом наблюдают за цветом жидкости. В начале процесса распада эритроцитов смесь становится слегка розовой, а при полном разрушении кровяных клеток – красной.

Таким образом, при определении осмотической резистентности эритроцитов получают 2 показателя: минимальный и максимальный.

Этот анализ помогает определить причину анемии. Кровь у пациента берут из вены. Специальной подготовки или соблюдения диеты перед анализом не требуется.

Как проводится анализ?

Чтобы провести пробы на осмотическую резистентность эритроцитов, в пробирки помещают гипотонический раствор NaCl разной концентрации (от 0,7 % до 0,22%). В каждую пробирку добавляют одинаковое количество крови, как правило – 0, 02 мл. В течение часа держат при комнатной температуре, после чего центрифугируют и по цвету раствора определяют начало разрушения эритроцитов и полный гемолиз. Если раствор слегка порозовел, это говорит о начале разрушения. При полном распаде раствор приобретает ярко-красный цвет.

В результате получают два параметра – максимальную и минимальную резистентность, которая выражается в процентах.

Для взрослых людей нормой считается:

максимальная резистентность – от 0,34% до 0,32%; минимальная – от 0,48% до 0,46%.

У детей до двух лет осмотическая устойчивость в норме выше, чем у более старших. У пожилых людей – немного ниже нормы.

Форма и зрелость красных клеток крови

Осмотическая резистентность эритроцитов зависит от формы этих клеток. Резистентность значительно ниже у красных кровяных телец, имеющих выраженную сферическую или шарообразную форму. Такие клетки очень подвержены разрушению под воздействием различных факторов. Форма эритроцитов может быть наследственно обусловлена или являться следствием их старения.

На устойчивость эритроцитов влияет также их возраст. Самая высокая резистентность выявляется у молодых клеток, имеющих плоскую форму.

Зависимость резистентности от зрелости, формы клеток

ОРЭ соответствует форме клеток. Резистентность меньше при явной сферической форме. Эти клетки больше подвержены повреждению.

Форма эритроцита обусловлена генетикой, на так же меняется по мере состаривания.

На устойчивость клеток влияет возраст. Она выше у молодых плоских клеток.

Профилактика

Наследственный сфероцитоз нельзя предупредить, но пациенты, страдающие данной патологией, могут обратиться к генетику, чтобы провести анализ по обнаружению дефектного гена, способного передать болезнь их детям. Профилактика наследственной формы болезни сводится к терапевтическим мерам при наступлении криза. В остальных случаях профилактические меры заключаются в обеспечении оптимальных условий для нормального кроветворения при помощи правильного питания, витаминотерапии и здорового образа жизни.

Подготовка к процедуре. Нормальные значения резистентности.

Пробирка с антикоагулянтом — важный момент при определении резистентности

Расчет значений осмотической резистентности позволит определить причину нехватки эритроцитов в крови пациента. Для проведения анализа кровь берется из вены и сразу же помещается в пробирку с антикоагулянтом, чтобы избежать ее свертывания. В каких-либо особых приготовлениях перед сдачей анализа нет необходимости — пациент может не менять привычный ему режим питания.

Для взрослого человека нормальными показателями являются следующие значения:

минимальная резистентность — не выше 0,48%;
максимальная — не ниже 0,32%

Следует помнить, что у маленьких детей показатели устойчивости значительно выше, чем у взрослых пациентов, в то время как у пожилых — немного ниже нормы.

Гемолиз крови, вызванный патогенными микроорганизмами

Существует несколько факторов, которые могут повлиять на достоверность данных анализа:

недавнее переливание крови;
присутствие во взятом образце патогенных микроорганизмов, которые вызывают гемолиз клеток;
некоторые заболевания, при которых количество зрелых эритроцитов в крови минимально (тяжелые формы анемии);
наконец, человеческий фактор — неосторожное обращение с наполненными пробирками может привезти к преждевременному гемолизу;

Если вышеперечисленные причины отсутствовали, а результат анализа выходит за пределы нормы, то можно говорить о серьезном заболевании, за которым последуют значительные нарушения обмена веществ в организме.

Способ определения средней осмотической резистентности эритроцитов

ОПИСАНИЕ п 1.1 542947 Союз Советских Социалистических Республик51) Государственный комите Совета Министров ССС по делам изобретений 53) УДК 543.9(088.8) открытии вания описания 21.03. а опубл 2) Авторы изобретени ф, М. Рабинович, А, Г, Рыбкина, А. Д. Манаеи У. А. Ватмахер енинградский филиал Всесоюзного научно-исследовательского института медицинского приборостроения(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СРЕДНЕЙ ОСМОТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВм ме Э, на мбеку Янов- времеможет смоти ем ко ппото орах ается удет Изобретение относится к лабораторньтодам диагностики в медицине.Известнье способы определения ОРпример, макроскоппческпй метод по ЛРпбьеру, микроскопический метод поскому, требуют значительных, затратцп па проведение исследования.Прототипом данному предложениюслужить способ определения средней оческой резпстептности эритроцптов путлометрпчсского определения степени гнического гемолиза 11. К недостаткам этого способа следует отнести большое время анализа.Целью изобретсшя является уменьшение ьременп анализа. Поставленная цель достшается тем, что готовят суспензии эритроцптов в растворах хлористого натрия с различной топпчностью с последующим определением изменений во времени электропроводпости каждого отдельного эрптроцита с помощью импульсного кондуктометрического датчика и регистрируют бпмодальпость эрптроцптометрпческой кривой с помощью многоканального амплитудного анализатора в растворах с различной концентрацией хлористого натрия.Определение СОРЭ по предлагаемому способу осуществляется в следующей последовательности,Готовят 10 гипотонических растворов хлористого натрия с концентрациями 0,52 — 0,34% через 0,02% (диапазон возможных изменений СОРЭ в условиях патологии).5 Каппллярную кровь в количестве 0,02 -0,05 мл разводят физиологическим раствором в отношении 1: 100 в : 500 (первое разведение).Готовят второе разведение крови в гппото- О 1 шческом растворе 0,42%-цой ХаС (средняявеличина СОРЭ в цормс) в отношсц 1 ш 1: 10000 — 1: 200 (общее разведение крови 1: 50000 в : 100000).Стаканчик с кровью во втором разведсшш 5 це позднее, чем через 10 — 15 с после приготовления устанавливают в счетчик п начинают регистрацию эрптроцитометрической кривой.ПО экрану копт 1)олы 1011 трбкп мпОгокацального амплитудного анализатора наблюдают О за формой кривой, Через 7 — 10 с начинают новую репстрацпю. Опер ацшо повторяют3 — 4 раза.Если в растворе 0,42%-ной ХаС 1 будет зарегистрирована бп модальность эрптроцитомет рическоц кривой, дополнительно проверяютповедение эрптроцптов в растворах 0,40/о- и 0,44% -цой МаС 1,Если бимодальости в указанных раствобнаружено не будет, за СОРЭ пришл О 0,42% -ная Ма С. Если бпмодальцость б542947 Формула изобретения Составитель М. Пантелеев Тскрсд Л. ГладковаРсдактор Т. Девятко Корректор Л. Котова Заказ 219/3 Изд. Ло 159 Тирак 1054 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 зарегистрирована еще в одном растворе, например в 0,44%-ной ХаС, за СОРЭ принимается промежуточное значение, т. е. 0,43%-пая Ха С 1.Если в растворе 0,42%-ной КаС 1 бпмодальность зарегистрирована не будет, направление сдвига СОРЭ определяют по направлению движения моды эритроцитометрической кривой во времени: при движении моды влево СОРЭ лежит в области растворов меньшей тоничностп, прп движении моды вправо — в области растворов большей тоничности. В соответствии с направлением движения моды производят исследование эрптроцптов в растворах 0,44 — 0,52%-ной плп 0,40 — 0,34%- ной КаС 1, как указано выше.Использование этого способа позволит значительно уменьшить трудоемкость анализа, объем крови, затраты времени, а также возможность использовать каппллярную кровь. Способ определения средней осмотпческойрезистентности эритроцитов путем прнготовле 5 ния суспензий эритроцитов в растворах хлористого натрия с различной тоничностью с последующим определением изменения ф 1 зических свойств эритроцптов, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью уменьшения времени анали 10 за, определяют изменение электропроводностикаждого отдельного эритроцпта с помощьюимпульсного кондуктометрического датчикаи по концентрации хлористого натрия в растворе, соответствующей появлению бимодаль 15 ности эритроцитометрпческой кривой, судятоб искомой величине.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1, Л. М. Предтеченский Руководство по20 лабораторным методам псследованця, М.,1950, 68,
Смотреть

Зависимость резистентности от формы и зрелости эритроцита

Показатель осмотической резистентности находится в прямой зависимости от зрелости, формы, а также и состава кровяной плазмы.

Форму эритроцитов определяют сопоставлением размеров: диаметра и толщины, что выражают индексом сферичности. Для нормальных клеток он находится в пределах 0,27-0,28, а значительные отличия от нормы наблюдаются при отклонениях, обусловленных наследственностью, когда эритроциты имеют шарообразную форму, что значительно снижает их резистентность.

Определение и причины изменения осмотической резистентности эритроцитов

Для осуществления своей основной функции — транспортировки кислорода и углекислого газа, мембраны красных кровяных клеток крови должны быть прочными и эластичными. Такие свойства крайне важны для сохранения оптимального уровня объёмного гомеостаза.

Старые, отработанные или инфицированные эритроциты, «маркируются» лимфатической системой и, проходя через селезёнку, разрушаются до составных компонентов:

билирубин повторно используется клетками печени;
аминокислоты участвуют в синтезе новых белков или становятся источником энергии.

Разрушение оболочки красных кровяных двояковогнутых дискоцитов и выход гемоглобина в плазму крови получил название «лаковая кровь» или гемолиз.

Осмотическая резистентность эритроцитов (ОРЭ) – это характеристика физико-химических свойств стабильности эритроцитных мембран и динамического равновесия водных компонентов интерстициальной жидкости.

Определение такой стойкости проводится доступными лабораторными методами, которые исследуют величины сопротивления стенок эритроцитов к разрушению, вызванного активным искусственным изменением осмотического давления.

Границы нормы

При исследовании проводят определение границ осмотической резистентности эритроцитов. Превышение или снижение этих показателей может означать патологию.

Верхняя граница ОРЭ в норме составляет не более 0,32%. Если резистентность становится меньше этого показателя, то это может свидетельствовать о следующих патологиях:

гемоглобинопатия;
желтуха застойного типа;
операция удаления селезенки;
талассемия;
полицитемия;
сильная потеря крови.

Если нижняя граница осмотической резистентности эритроцитов становится больше 0,48%, то это может быть при разных видах гемолитической анемии и после отравления свинцовыми соединениями.

При некоторых видах патологий крови границы ОРЭ могут расширяться. Так происходит при анемии, связанной с авитаминозом В12 и разрушении эритроцитов при остром гемолитическом кризе.

Норма резистентности

Норма показателя ОРЭ не зависит от возраста и пола пациента. Небольшое снижение этого значения наблюдается у пожилых людей, а повышение — у детей до 2 лет.

Нормой осмотической резистентности эритроцитов считается максимальный показатель — от 0,32 до 0,34% и минимальный — от 0,46 до 0,48%.

Это означает, что нормальные эритроциты проявляют наибольшую устойчивость в растворе концентрацией 0,32 — 0,34%, и наименьшую — в 0,43 — 0,48%.

Отклонения от стандартных показателей

Талассемия как причина снижения резистентности

ОРЭ менее 0,33% развивается в следующих ситуациях:

значительные кровопотери;
при талассемии (наследуемое заболевание, при котором нарушен синтез белков, входящих в состав гемоглобина);
при спленэктомии (удалении части селезенки — органа, активно участвующем в процессах кроветворения);
при полицитемии (нарушение функций кроветворных клеток костного мозга);

Резистентность более 0,48% связана с такими заболеваниями как:

наследственная гемолитическая анемия (передающаяся по наследству патология, при которой организм активно разрушает свои же клетки крови);
гемолитическая анемия новорожденных (диагностируется в течение первых дней жизни младенца. Может быть как наследственной, так и приобретенной);
отравление солями тяжелых металлов;

Как правило, отклонения от нормальных показателей резистентности сигнализируют о сбоях в работе организма, причем чаще всего диагностируемые патологии носят наследственный характер.

Метод исследования

Основной лабораторный метод определения стойкости эритроцитов к разрушению – это реакция гипотонического солевого раствора и крови, смешанного в одинаковых объемах. Анализ позволяет выявить стабильность мембраны клетки. Альтернативный метод определения ОРЭ – фотоколориметрический, при котором измерения производят специальным аппаратом – фотоколориметром.

Физраствор представляет собой смесь дистиллированной воды и хлорида натрия. В растворе с концентрацией 0,85% эритроциты не разрушаются, его называют изотоническим. При более высокой концентрации получится гипертонический, а ниже – гипотонический раствор.

В них эритроциты погибают, сжимаясь в гипертоническом, и набухая в гипотоническом р-ре.

Как проводится процедура?

Определение ОРЭ проводится добавлением равного количества крови (обычно 0,22 мл) в гипотонический раствор NaCl различных концентраций (0,7-0,22%). После часа выдержки смесь центрифугируют. В зависимости от цвета устанавливают начало распада и полный гемолиз. В начале процесса раствор имеет слегка розовый цвет, а ярко красный свидетельствует о полном распаде эритроцитов. Результат выражается в двух характеристиках резистентности, имеющих процентное выражение – минимальной и максимальной.

При наличии вторичной гемолитической анемии при дефиците глюклзо-6-фосфатдигидрогеназы, анализ может показать нормальную ОРЭ, что обязательно учитывают перед проведением исследования

Отклонения от нормы

Резистентность и прочность мембран эритроцитов находятся в зависимости от наследственных заболеваний или особенностей патологии.
Причинами роста или падения ОРЭ выступают следующие факторы:

Повышение стойкости эритроцитов наблюдается при механической желтухе, когда на них оседают холестериновые отложения, приобретенном или наследственном сфероцитозе, стомацитодозе, различных формах гемоглобиноза.
Значительная кровопотеря способствует перенасыщению крови незрелыми эритроцитами и истончению их мембран. Эти же признаки характерны при наличии онкогематологии, железодефицитной анемии, иммуносекретирующих опухолей и гемоглобинопатий.

Отдельные сердечно-сосудистые болезни вызывают насыщение крови уплощенными эритроцитами, имеющими небольшой индекс сферичности, а некоторые наследственные заболевания – клетками, имеющими чрезмерно шарообразную форму. Клетки с подобными аномалиями характерны плохой резистентностью.

Причины снижения ОРЭ:

Сердечная недостаточность, вызывающая набухание до приобретения клетками сферической формы.
Генетически обусловленная аномалия, когда в крови находятся шарообразные эритроциты.
При старении эритроцитов и на последних этапах их жизненного цикла. В этот период клетки становятся округлыми, а проницаемость стенок заметно возрастает.

Красные кровяные тельца показывают большую устойчивость по отношению к изотоническим растворам, в которых они долго сохраняются, не подвергаясь влияниям среды, так как осмотического обмена между нею и клетками не происходит. Эритроциты в гипертонических растворах быстро сморщиваются, отдавая среде свою воду; в гипотонических наблюдают набухание эритроцитов, вследствие поступления в клетку воды, выщелачивание гемоглобина и, наконец, полный распад эритроцитов, потерявших свое красящее вещество; однако, действие гипотонического раствора зависит от его концентрации, так как только при низких разведениях получается быстрый и полный гемолиз всей массы взвешенных эритроцитов. Растворы, близкие по концентрации к изотоническим, разрушают лишь отдельные, наименее устойчивые клетки, вызывая лишь частичный гемолиз, в то время как главная их масса совершенно не изменяется. Таким образом, устойчивость красных кровяных телец по отношению к гипотоническим растворам выражена далеко не одинаково у различных клеток. В то время как одни усиленно сопротивляются действию осмоса, другие быстро разрушаются под его влиянием. Эту начальную стадию гемолиза, которая выражена лишь появлением лёгкого желтоватого оттенка жидкости, обозначают как Минимальную резистентность Эритроцитов. Концентрация раствора, вызвавшего полный гемолиз, определяет собой Максимальную резистентность. Колебания между той и другой носят название Ширины резистентности.

Наиболее простым способом определения резистентности эритроцитов является способ Лимбек — Рибьера. В серии пробирок, приготовленных для реакции, делают ряд разведений раствора NaCl с расчётом, чтобы концентрация жидкости в каждой следующей пробирке была на 0,02 ниже предыдущей. Для этого в первую из пробирок отмеряют 0,6 куб. см основного 1 % раствора NaCl, во вторую — 0,58куб. см, в третью—0,56 куб. см и т. д., уменьшая содержание основного раствора в каждой следующей пробирке на 0,02. Последняя из них содержит всего 0,30 куб. см основного раствора. Затем при помощи пипетки в каждую из пробирок вносят дестиллированную воду с расчётом, чтобы объём всего раствора довести до 1 куб. см.

Приготовив ряд разведений, набирают пипеткой из гемоглобинометра Сали 20 мм крови и смешивают её с раствором в первой пробирке. Точное такое же количество крови отмеряют и во все остальные пробирки. Перемешав жидкость и выждав затем 10—15 минут, пробирки устанавливают в центрифугу на 5 минут и просматривают результаты. Там, где произошёл полный гемолиз, жидкость окрашена в яркокрасный цвет и является совершенно прозрачной. В пробирках с частичным гемолизом окраска выражена слабее и на дне можно заметить кроваво-красный осадок. Совершенно бесцветные растворы указывают на отсутствие следов гемолиза.

Таким образом, при исследовании нормальной крови в пробирках с раствором, близким к изотоническому, жидкость остаётся совершенно бесцветной и прозрачной. Лёгкое желтоватое окрашивание раствора указывает на начало гемолиза (минимальная резистентность), в то время как слабое покраснение— показатель ясного гемолиза. При сильном гемолизе, несмотря на вишнево-красную окраску жидкости, на дне пробирки можно заметить небольшой осадок. Полный гемолиз даёт резкую красную окраску жидкости без следов осадка (максимальная резистентность).

У здоровых лошадей минимальная резистентность колеблется в пределах 0,54—0,66, максимальная — между 0,4 0,48. Ширина резистентности — 0,4—0,66.

Изменяющаяся под влиянием болезненного процесса резистентность эритроцитов в некоторых случаях даёт очень ценные диагностические указания. В настоящее время её выдвигают в качестве критерия при оценке регенеративной способности кроветворного аппарата. Молодые, только что выброшенные в кровяное русло эритроциты бедны Р405 и липоидами, вследствие чего они оказываются наименее устойчивыми формами и гемолизируются значительно раньше старых, насыщенных фосфором и липоидами. Чем старше клетка, тем резче выражена её устойчивость по отношению к гипотоническим растворам. Повышенная максимальная резистентность эритроцитов, являясь, таким образам, следствием ослабления процессов регенерации костного мозга, указывает, что главная масса эритроцитов состоит из очень старых клеток.

Чем ниже минимальная резистентность, чем меньшую устойчивость показывают эритроциты по отношению к гипотоническим растворам, тем энергичнее процессы регенерации, выбрасывающие в ток крови новые массы молодых, ещё не созревших клеток, тем моложе эритроциты.

Понижение минимальной резистентности обнаруживают при заболеваниях, сопровождающихся усиленным гемолизом и гемолитической желтухой. При мышечном переутомлении наблюдают обычно снижение обоих видов резистентности на 0,02—0,04%.

Весьма ценным этот метод исследования считается также при пробных испытаниях лошадей, отражая степень тренировки животного, его подготовку и способность к выполнению определённой нагрузки. У нетренированных лошадей максимальная резистентность высока; путём постепенного втягивания животных в работу её можно значительно снизить. У хорошо подготовленных лошадей максимальная резистентность значительно ниже.

Как исследуют ОРЭ

Для определения осмотической резистентности эритроцитов проводят наблюдения за реакцией крови и раствора хлористого натрия. Эти ингредиенты смешивают в равных пропорциях.

Если концентрация раствора хлорида натрия равна 0,85%, то его называют изотоническим (или физраствором). При более низком содержании соли химикат называют гипотоническим, а при более высоком – гипертоническим. В изотоническом растворе эритроциты не разрушаются, в гипотоническом – набухают и распадаются, а в гипертоническом – сжимаются и погибают.

Источники

https://dlja-pohudenija.ru/serdcze/simptomy-osmoticheskoj-rezistentnosti-eritroczitov-i-metod-opredeleniya-pokazatelej
https://MedAnaliz.pro/krov/eritrotsity/osmoticheskaya-rezistentnost
https://gidanaliz.ru/analiz/osmoticheskaya-rezistentnost-eritrocitov.html
https://1pokrovi.ru/analizy-krovi/obshhij-analiz/eritrocity/osmoticheskaya-rezistentnost.html
https://fb.ru/article/366116/osmoticheskaya-rezistentnost-eritrotsitov-metod-opredeleniya

Методики исследования и показатели нормы

Определение и сравнительный анализ двух количественных показателей гемолиза по капиллярной крови

Для проведения оценки стойкости эритроцитов к осмотическому воздействию, за основу было взято характерное поведение клеточных мембран – в гипертоническом солевом растворе красные кровяные клетки теряют воду и сморщиваются, а в гипотонической среде, за счёт перенасыщения, размеры эритроцитов увеличиваются до граничных пиковых уровней.

Недавно предложенное исследование ОРЭ, не венозной, как обычно, а трёх порций капиллярной крови, состоит в определении и сравнительном анализе двух количественных показателей гемолиза:

Первый забор соединяют с дистиллированной водой и принимают как оценочный шаблон 100% гемолиза;
Усреднённую оценку состояния мембран всех эритроцитов получают при исследовании гемолиза в 0,9 % растворе NaCl. Нормальными показателями считаются величины 1,61±0,23%;
Нагрузочную осмотическую пробу по определению надосадочной оптической плотности получают при сравнении шаблона с порцией крови, соединённой с 0,45% раствором натрия хлорида. Норма = 25,16±1,83%.

Определение ОРЭ, при помощи проверенного временем, основного лабораторного анализа происходит по трёхчасовой унифицированной методике исследования венозной крови, фиксирующей min-max показатели резистентности:

минимальная стойкость определяется по величине максимальной концентрации гипотонического раствора – анализ проводиться при помощи серий, с постепенно снижающимися концентрациями соляного раствора (начиная с 0,85%), при котором самые нестойкие эритроциты начинают деформироваться спустя 3 часа;
максимальная резистентность считается по уровню максимальной концентрации гипотонического раствора, когда все эритроциты подвергаются гемолизу за 3 часа.

В норме, начало распада (минимальная резистентность) отмечается в 0,5 — 0,45% растворе хлорида натрия, а полный гемолиз (максимальная ОРЭ) происходит в 0,4–0,32% растворе.

Следует учитывать, что такие дегенеративные формы как сфероциты, более всего подвержены распаду в гипотонических растворах.

Важно внимательно относится к диагностике вторичной гемолитической анемии с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, поскольку такая патология даёт нормальные показатели анализа «Осмотическая резистентность эритроцитов».